动物细胞培养及培养基制备

动物细胞培养始于二十世纪初，目前已成为生物、医学领域研究中广泛应用的技术。利用动物细胞培养技术能够生产重组蛋白药物、抗体、疫苗等生物制品并可用于细胞治疗领域，已成为生命科学、医学行业的重要组成部分。
动物细胞培养技术是将离体的动物细胞在体外进行培养，由于动物细胞种类不同，对营养物质和培养环境的要求也存在差异，因此需要根据细胞的不同种类进行动物细胞培养基的优化。根据动物细胞的种类，优化培养基实现细胞培养的不同目的要求，成为动物细胞培养过程中亟待解决的核心问题。然而，目前国内80%以上的企业和科研机构仍然依赖于国外进口培养基，缺乏自主知识产权技术，一方面受制于人，增加了生产成本，另一方面还难于对细胞培养过程进行优化。因此，亟需出版一本关于动物细胞培养及培养基制备方面的著作。
鉴于以上原因，在长期的科研活动中，我们不断总结经验，交流学习，在查阅国内外大量相关文献的基础上，结合自己的实践，编著了《动物细胞培养及培养基制备》一书。全书共分十一章，主要内容包括动物细胞培养的基础知识、动物细胞培养方法、经典动物细胞培养基、低血清动物细胞培养基、昆虫细胞培养基、CHO细胞培养基、HEK293细胞培养基、疫苗细胞培养基、干细胞培养基、免疫细胞培养基、动物细胞培养基标准及质量控制等内容。
本书可作为生物医学、生物制药学等相关专业本科生、研究生以及从事生物医学等行业的广大科研工作者的参考用书。参加本书撰写的人员主要来自河南省重组药物蛋白表达系统国际联合实验室、新乡医学院的科研一线人员。他们具有多年丰富的细胞培养、细胞培养基研发经验，为本书的编写投入了大量的精力，另外，化学工业出版社在本书的编辑加工中做了大量细致的工作，在此对他们表示衷心的感谢！
因著者水平有限，加之日常繁重的科研教学活动，尽管每位著者都为本书付出了辛勤的劳动，仍难免出现疏漏和不足，敬请各位读者提出宝贵意见，以便再版时改正！

著者
2021年8月于新乡医学院

王天云，博士，教授，博士生导师。新乡医学院“太行学者”特聘教授。河南省重组药物蛋白表达系统国际联合实验室及生物创新药物工程技术研究中心主任，中国生物化学与分子生物学会理事，河南省生物化学与分子生物学会理事长，教育部“长江学者”，国家科技进步奖评审专家。主持国家自然科学基金4项，省重大科技专项1项，创新杰出人才项目1项；参与国家“863”课题、国家重大科技专项各1项。获省科技进步二等奖2项、三等奖1项。申请国家发明专利35项，已授权16项。发表研究论文86篇，其中SCI收录53篇，被引1076次。长期从事哺乳动物细胞表达系统的研究，建立了国际水平的哺乳细胞表达系统，包括高效表达载体、细胞系及培养基。已实现技术转移2项，专利转化8项。

《动物细胞培养及培养基制备》主要介绍了动物细胞培养的基础知识、动物细胞培养方法、经典动物细胞培养基、低血清动物细胞培养基、昆虫细胞培养基、CHO细胞培养基、HEK293细胞培养基、疫苗细胞培养基、干细胞培养基、免疫细胞培养基及动物细胞培养基标准及质量控制等内容。
本书反映了近十年来动物细胞培养基的最新进展，可作为生物制药相关专业本科生、研究生及从事生物制药的广大科研工作人员参考用书。

第一章动物细胞培养的基础知识1
第一节动物细胞培养的分类、发展史及应用1
一、动物细胞培养的概念及分类1
二、动物细胞培养的发展史2
三、动物细胞培养技术的应用6
第二节动物细胞培养的基本知识7
一、动物细胞培养的细胞生物学知识7
二、体外培养动物细胞的分型7
三、体外培养动物细胞的生长和增殖过程8
四、体外培养动物细胞的生长条件10
第三节动物细胞培养基12
一、动物细胞培养基的成分12
二、动物细胞培养基分类、选择及保存15
三、优化动物细胞培养基17
第四节动物血清及替代物18
一、血清分类18
二、血清的主要成分及作用19
三、血清储存、解冻及处理20
四、血清测试21
五、动物血清潜在风险及预防22
六、血清替代物24
参考文献26

第二章动物细胞培养方法28
第一节动物细胞监管与鉴定28
一、动物细胞监管29
二、动物细胞系的鉴定31
第二节动物细胞污染鉴定与消除36
一、常见动物细胞污染类型及原因36
二、常见生物污染物的种类及检测37
三、细胞污染的预防39
四、细胞污染的消除43
第三节动物细胞的冻存与复苏46
一、动物细胞的冻存46
二、冻存细胞的储存47
三、冻存细胞的运输50
四、冻存细胞的复苏51
第四节动物细胞库的建立53
一、动物主细胞库建立53
二、动物主细胞库评估54
第五节动物细胞培养相关试剂的制备56
一、平衡盐溶液56
二、生物缓冲溶液59
三、细胞消化和解离试剂60
四、细胞冻存液和低温保存液的配制63
五、细胞计数和活力测定相关试剂66
六、消除细胞污染常用溶液67
参考文献70

第三章经典动物细胞培养基73
第一节经典动物细胞培养基73
一、经典动物细胞培养基及应用73
二、经典动物细胞培养基配方75
第二节动物细胞培养基制备78
一、液体细胞培养基的制备78
二、干粉细胞培养基的制备81
参考文献83

第四章低血清动物细胞培养基85
第一节低血清动物细胞培养基的概念及应用85
一、低血清动物细胞培养基的概念及特点85
二、低血清动物细胞培养基的应用86
第二节常见低血清培养基的成分、配方及制备87
一、低血清动物细胞培养基成分及作用87
二、低血清动物细胞培养基种类及配方88
第三节低血清动物细胞培养基制备93
一、液体细胞培养基的配制93
二、干粉细胞培养基的配制94
参考文献95

第五章昆虫细胞培养基97
第一节昆虫细胞的种类、培养及应用97
一、昆虫细胞的种类97
二、昆虫细胞的培养98
三、昆虫细胞培养的应用100
第二节昆虫细胞培养基101
一、昆虫细胞经典培养基101
二、昆虫细胞无血清培养基104
参考文献106

第六章CHO细胞培养基108
第一节CHO细胞的种类、培养和应用108
一、CHO细胞的种类108
二、CHO细胞的应用111
第二节CHO细胞培养基112
一、CHO细胞经典培养基112
二、CHO细胞无血清培养基112
三、CHO细胞培养基开发的新进展127
参考文献130

第七章HEK293细胞培养基132
第一节HEK293细胞的种类、培养和应用132
一、HEK293细胞的种类132
二、HEK293细胞的培养135
三、HEK293细胞的应用138
第二节HEK293细胞培养基及制备139
一、HEK293细胞经典培养基139
二、HEK293细胞无血清培养基139
参考文献141

第八章疫苗细胞培养基143
第一节疫苗细胞的种类及应用143
一、用于疫苗生产的常用细胞系144
二、当前开发的新型细胞系147
三、用于疫苗生产的其他新细胞系149
四、疫苗细胞的培养150
五、疫苗细胞的应用151
第二节疫苗细胞培养基151
一、疫苗细胞经典培养基152
二、疫苗细胞无血清培养基154
参考文献159

第九章干细胞培养基161
第一节干细胞种类、培养及应用161
一、干细胞的种类161
二、干细胞的培养163
三、干细胞的应用167
第二节干细胞培养基168
一、干细胞经典培养基168
二、干细胞无血清培养基169
参考文献178

第十章免疫细胞培养基180
第一节免疫细胞的种类、培养及应用180
一、免疫细胞种类180
二、免疫细胞的培养184
三、免疫细胞的应用186
第二节免疫细胞培养基187
一、免疫细胞经典培养基187
二、免疫细胞无血清培养基189
参考文献192

第十一章动物细胞培养基标准及质量控制194
第一节动物细胞培养基标准194
一、动物细胞培养基的国际相关标准与要求194
二、动物细胞培养基的国内相关法律法规195
第二节细胞培养基生产企业质量达标检查管理指导原则196
一、申请单位需提供的材料196
二、材料审核和现场检查196
三、检查结果评定197
第三节细胞培养基质量检验方法198
一、理化指标检测198
二、微生物检查法200
三、细胞生长试验200
四、细胞培养基安全技术说明201
第四节细胞培养基质量控制202
一、细胞培养基生产的GMP管理202
二、细胞培养基的生产和过程控制205
参考文献208

附录中英文词汇表209