新编微生物学实验技术

微生物学实验技术是微生物学的重要组成部分，其方法独特、实践性强、应用面广、技术综合等，已渗透到现代生命科学的相关领域并推动其发展。加强微生物学实验教学，对培养同学们观察能力、动手能力，提高辩证思维能力和创新能力具有重要作用，并可为日后从事微生物学相关的教学、科研和生产实践打下扎实基础。
本书2008年第1版名称是《微生物学实验技术》，2014年进行修订并更名为《新编微生物学实验技术》，2020年列为河南省“十四五”规划教材。《新编微生物实验技术》是在总结生物工程、生物制药、食品质量与安全、食品科学与工程、乳品工程专业多年实验教学经验基础上，结合往届毕业生就业去向，参考兄弟院校的实验教材及相关资料编写而成。本书对微生物学的各类实验技术和操作技能进行了较系统的论述，一方面，着重加强同学们对微生物学基本实验技能和动手操作能力的训练；另一方面，着重加深同学们对微生物学实验技术在生产实践中应用重要性的认识。全书内容总体可概括为以下三个方面：
一、基本操作技能训练的实验：主要包括无菌操作技术、细菌染色与镜检技术、培养基制备与灭菌技术、微生物接种与分离纯化技术、菌种鉴定与保藏技术等。
二、加深理论知识理解的实验：主要包括各类微生物形态观察、生理生化试验、生长曲线测定、环境因素对微生物的影响、微生物菌种选育及常用免疫学技术等。
三、生产实践中常用到的实验：主要包括生产实践中常用微生物分离与性能鉴定技术，以及动物实验技术、食品微生物指标检测技术等内容。
本次修订在保留2014年版主要内容和特点的基础上，新增加了18个实验：培养基的制备2个、现代分子微生物实验7个、病毒常用实验技术3个、常用免疫学实验技术6个；参照最新国标对食品微生物指标检测技术一章的5个实验进行了更新完善，力求使教材内容更加全面，更好与社会发展接轨，更好适应新时代高级专业技术人才培养的需要。
本书的具体编写情况为：秦翠丽编写第一章、第二章、第十三章，牛明福编写第十一章、第十四章、第十五章，尤晓颜编写第七章、第八章、第九章、第十章，侯颖编写第十二章、附录，宫强编写第三章，第四章、第五章、第六章。
本书的编写和出版得到了河南科技大学教务处、化学工业出版社有限公司、河南科技大学食品与生物工程学院、河南科技大学动物医学院、河南农业大学植物保护学院、洛阳师范学院生命科学院、洛阳师范学院食品与药品学院、普莱柯生物工程有限公司、华兰生物工程有限公司等单位的大力支持，对此表示衷心的感谢。
本书在编写过程中还得到了河南科技大学食品与生物工程学院康怀彬、古绍彬教授，河南科技大学动物医学院汪洋教授，河南农业大学植物保护学院郝有武博士，洛阳师范学院生命科学学院陈万光教授、食品与药品学院贾礼博士，普莱柯生物工程有限公司田克恭研究员，华兰生物工程有限公司王伟洁助理研究员等的大力帮助和热心支持，河南科技大学食品与生物工程学院龚明贵、张勇法、李市场、孙晓菲、张红梅、赵君峰等博士为本书的资料整理和编写工作付出了很多辛勤劳动，在此向他们一并表示衷心的感谢。
本书编写人员均为教龄在10年以上的教学与科研一线骨干教师，他们在长期的微生物学教学与研究工作中积累了丰富的实践经验，本书是他们集体智慧的结晶，但由于学识水平所限，教材中的疏漏和不当之处在所难免，敬请读者批评指正。

编者
2022年12月12日 

本书全面系统介绍了微生物学基本实验技术及其在微生物相关领域的生产实践与食品卫生检测方面的应用。全书包括十五章九十八个实验，内容涵盖显微镜使用技术，微生物染色技术，培养基制备技术，消毒、灭菌与除菌技术，微生物的接种与分离培养技术，微生物的生长与环境条件，微生物的生理生化试验，分子微生物学实验技术，微生物菌种选育技术，菌种保藏技术，病毒常用实验技术，常用免疫学实验技术，动物实验技术，生产实践中常用微生物分离与性能鉴定技术，食品微生物指标检测技术等；附录部分，列出了微生物学实验常用染色液、指示剂、试剂、溶液、缓冲液、培养基配制方法，以及微生物学实验中一些常用数据表。本书在编写过程中，注重实验内容的系统性、应用性与科学性，可作为从事生物与食品等相关工作人员的工具书和参考书。

实验须知 001

第一章 显微镜使用技术 003
实验一 普通光学显微镜的使用 003
实验二　暗视野显微镜的使用 009
实验三　相差显微镜的使用 011
实验四　荧光显微镜的使用 012
实验五　电子显微镜的使用 017 

第二章 微生物染色技术 023
实验一　单染色法 023
实验二　复染色法 025
实验三　特殊染色法 027
实验四　负染色法 031
实验五　微生物细胞内贮藏物质的染色 032
实验六　霉菌菌丝染色 034
 
第三章 培养基制备技术 035
实验一　细菌常用培养基的配制 036
实验二　真菌常用培养基的配制 037
实验三　选择性培养基的配制 038
实验四　鉴别性培养基的配制 040
 
第四章 消毒、灭菌与除菌技术 043
实验一　加热及紫外线消毒与灭菌 043
实验二　过滤除菌 047
实验三　化学药物消毒与灭菌 049
实验四　玻璃器皿的洗涤、包扎与灭菌 051
 
第五章 微生物的接种与分离培养技术 054
实验一　微生物的接种 054
实验二　微生物的分离纯化方法 059
实验三　微生物的培养方法 063
实验四　微生物的培养特征观察 067 

第六章　微生物的生长与环境条件 071
实验一　微生物细胞大小的测量 071
实验二　微生物数量的测定—血细胞计数板法 073
实验三　细菌生长曲线的测定 075
实验四　酵母菌死活细胞的鉴别 076
实验五　环境因素对微生物生长的影响 077 

第七章　微生物的生理生化试验 082
实验一　细菌的生理生化试验 082
实验二　酵母菌的生理生化试验 088
实验三　霉菌的生理生化试验 093
 
第八章　分子微生物学实验技术 096
实验一　细菌质粒的提取与检测 097
实验二　细菌基因组DNA的提取 099
实验三　细菌DNA中（G+C）mol%含量的测定 101
实验四　利用16S rRNA序列鉴定微生物 104
实验五　核酸分子杂交技术检测微生物 106
实验六　利用ITS序列鉴定真菌 108
实验七　微生物群落结构多样性的分析 110
 
第九章　微生物菌种选育技术 114
实验一　诱变育种的基本程序及操作要点 114
实验二　紫外线诱变最适剂量的测定 121
实验三　高产蛋白酶曲霉的选育 124
实验四　营养缺陷型突变株的筛选 126
实验五　抗噬菌体菌株的选育 128
实验六　酵母菌细胞原生质体融合 130
实验七　电诱导酵母菌与短梗霉属间的融合 133
 
第十章　菌种保藏技术 136
实验一　常用简易保藏法 136
实验二　冷冻真空干燥保藏法 139
实验三　液氮超低温冷冻保藏法 141
实验四　厌氧性细菌保藏法 143
实验五　噬菌体保藏法 144
实验六　食用菌菌种保藏法 145
实验七　蒸馏水或其他溶液保藏法 148
 
第十一章　病毒常用实验技术 150
实验一　病毒形态观察与大小测定 150
实验二　病毒包涵体的观察 151
实验三　噬菌体的分离与纯化 153
实验四　噬菌体效价的测定 155
实验五　病毒的鸡胚接种 157
实验六　病毒的细胞分离培养法 160
实验七　病毒的半数细胞感染量（CCID50）测定 164
实验八　病毒蚀斑分析实验 167
 
第十二章　常用免疫学实验技术 171
实验一　抗原的制备 171
实验二　免疫血清的制备 173
实验三　凝集反应 176
实验四　沉淀反应 178
实验五　补体结合反应 180
实验六　血凝试验与血凝抑制试验 184
实验七　免疫酶测定法 186
实验八　中和试验 189
实验九　细菌内毒素测定实验（鲎试剂凝胶法） 191
实验十　外周血单个核细胞的分离与观察 195
实验十一　巨噬细胞吞噬功能实验 196
实验十二　人体结核菌素试验 198
 
第十三章　动物实验技术 200
实验一　实验动物保定法 201
实验二　实验动物接种法 203
实验三　实验动物采血法 207
实验四　感染动物观察 209 

第十四章　生产实践中常用微生物分离与性能鉴定技术 212
实验一　乳酸菌的分离与性能鉴定 212
实验二　醋酸菌的分离与性能鉴定 215
实验三　谷氨酸产生菌的分离与性能鉴定 216
实验四　枯草芽孢杆菌的分离及初筛 218
实验五　酒曲中酵母菌的分离 219
实验六　啤酒酵母的分离 220
实验七　根霉的分离 221
实验八　柠檬酸产生菌的分离 222
实验九　黑曲霉糖化酶菌株的分离 223
实验十　米曲霉的分离 224
实验十一　土壤中自生固氮菌的分离 225
实验十二　豆科植物根瘤中根瘤菌的分离 226
实验十三　土壤中苏云金杆菌的分离 227
实验十四　土壤中放线菌的分离及其抑菌活性的测定 228
实验十五　光合细菌的分离 230
实验十六　产甲烷细菌的富集与分离 232
实验十七　香菇纯种的分离 234 

第十五章　食品微生物指标检测技术 237
实验一　食品中菌落总数的测定 237
实验二　食品中大肠菌群MPN的测定 241
实验三　食品中沙门菌的检验 243
实验四　食品中金黄色葡萄球菌的定性检验 251
实验五　食品中副溶血性弧菌的检验 254 

附录 260 
附录一 常用染色液、指示剂及试剂的配制 260
附录二　溶液与缓冲液的配制 265
附录三　常用培养基配制 272
附录四　微生物学实验中常用数据表 290
附录五　最可能数检索表 292
附录六　常见沙门氏菌抗原表 292

参考文献 298